Radioimmunanalys - Radioimmunoassay

En radioimmunanalys ( RIA ) är en immunanalys som använder radiomärkta molekyler i en stegvis bildning av immunkomplex . En RIA är en mycket känslig in vitro- analysteknik som används för att mäta koncentrationer av ämnen, vanligtvis mäta antigenkoncentrationer (till exempel hormonnivåer i blod ) med användning av antikroppar .

Även om RIA-tekniken är extremt känslig och extremt specifik och kräver specialutrustning, är den fortfarande en av de billigaste metoderna för att utföra sådana mätningar. Det kräver särskilda försiktighetsåtgärder och licensiering, eftersom radioaktiva ämnen används.

Däremot är en immunoradiometrisk analys (IRMA) en immunanalys som använder radiomärkta molekyler men på ett omedelbart snarare än stegvis sätt.

Ett radioallergosorbenttest (RAST) är ett exempel på radioimmunanalys. Det används för att upptäcka det orsakande allergenet mot en allergi .

Metod

För att utföra en radioimmunanalys görs klassiskt en känd mängd av ett antigen radioaktivt , ofta genom att märka det med gammaradioaktiva isotoper av jod , såsom 125-I , fästa vid tyrosin . Detta radiomärkta antigen blandas sedan med en känd mängd antikropp för det antigenet och som ett resultat binder de två specifikt till varandra. Därefter tillsätts ett serumprov från en patient som innehåller en okänd mängd av samma antigen. Detta får det omärkta (eller "kalla") antigenet från serumet att konkurrera med det radiomärkta antigenet ("hett") om antikroppsbindningsställen. När koncentrationen av "kallt" antigen ökas, binder mer av det till antikroppen, vilket förskjuter den radiomärkta varianten och minskar förhållandet mellan antikroppsbundet radiomärkt antigen och fritt radiomärkt antigen. De bundna antigenerna separeras sedan och radioaktiviteten hos det fria (obundna) antigenet som finns kvar i supernatanten mäts med användning av en gammaräknare .

Denna metod kan i princip användas för vilken biologisk molekyl som helst och är inte begränsad till serumantigener, och det krävs inte heller att använda den indirekta metoden för att mäta det fria antigenet istället för att direkt mäta det fångade antigenet. Om det till exempel är oönskat eller inte möjligt att radiomärka antigenet eller målmolekylen av intresse, kan en RIA göras om två olika antikroppar som känner igen målet är tillgängliga och målet är tillräckligt stort (t.ex. ett protein) för att presentera flera epitoper till antikropparna. En antikropp skulle radiomärkas som ovan medan den andra skulle förbli omodifierad. RIA skulle börja med att den "kalla" omärkta antikroppen fick interagera och binda till målmolekylen i lösning. Företrädesvis immobiliseras denna omärkta antikropp på något sätt, såsom kopplad till en agarospärla , belagd med en yta, etc. Därefter får den "heta" radiomärkta antikroppen interagera med det första antikroppsmålmolekylkomplexet. Efter omfattande tvättning mäts den direkta mängden bunden radioaktiv antikropp och mängden målmolekyl kvantifieras genom att jämföra den med en referensmängd som analyserats samtidigt. Denna metod liknar i princip den icke-radioaktiva sandwich ELISA- metoden.

Historia

Denna metod utvecklades av Solomon Berson och Rosalyn Sussman Yalow vid Veterans Administration Hospital i Bronx , New York. Denna revolutionära utveckling gav Dr. Yalow Nobelpriset för medicin 1977, den andra kvinnan någonsin som vann det. I sitt acceptanstal sa Dr. Yalow, "Världen har inte råd med förlusten av talangerna för hälften av dess folk om vi ska lösa de många problem som drabbar oss." Yalow delade Nobelpriset med Roger Guillemin och Andrew Schally som fick priset baserat på deras forskning om "hjärnproduktion av peptidhormon".

Referenser

steg i radioimmunteknik

externa länkar

• Radioimmunanalys vid US National Library of Medicine Medical Subject Headings (MeSH)
• Radioimmunanalys (RIA)