Korrelativ ljuselektronmikroskopi - Correlative light-electron microscopy
Korrelativ ljuselektronmikroskopi ( CLEM ) är kombinationen av ett optiskt mikroskop - vanligtvis ett fluorescensmikroskop - med ett elektronmikroskop . I ett integrerat CLEM-system avbildas provet med en elektronstråle och en optisk ljusväg samtidigt. Traditionellt skulle prover avbildas med två separata mikroskopimodaliteter, eventuellt vid olika anläggningar och med olika provberedningsmetoder. Integrerad CLEM anses därför vara fördelaktig eftersom metoden är snabbare och enklare, och det minskar risken för förändringar i urvalet under datainsamlingsprocessen. Överlagring av de två bilderna utförs således automatiskt som ett resultat av integrationen av två mikroskop.
Denna teknik används för att få information i olika längdskalor: elektronmikroskopet ger högupplöst information ner till nanoskalan, medan fluorescensmikroskopet belyser de intressanta regionerna. CLEM används för olika discipliner inom biovetenskap , inklusive neurovetenskap , vävnadsforskning och proteinforskning .
Korrelativ mikroskopi är mycket mer än bara en kombination av mikroskop utan också av programvara, tekniker och data.
Fluorescensmikroskop
Som förberedelse för avbildning med ett fluorescensmikroskop kan olika metoder användas, såsom fluoroforer eller färgämnen, immunmärkning och genetiskt kodade fluorescerande proteiner. Olika fluorescerande etiketter kan användas för att markera flera regioner av intresse i provet. Nyligen kombinerade Kumar et al FRET-baserade molekylspänningsmätningar med kryo-elektronmikroskopi för att studera hur kraft på talin (ett fokalt vidhäftningsprotein som direkt kopplar integriner till aktin) är relaterat till aktinorganisation. Regioner med hög talinspänning har högt inriktade och linjära trådformiga aktin medan regioner med låg spänning har mindre väl inriktad aktinstruktur.
Elektron mikroskop
Elektronmikroskopet används för att erhålla strukturell information på nano-skala. Till skillnad från ett optiskt mikroskop kan ett elektronmikroskop överträffa ljusets diffraktionsgräns . Detta beror på att våglängden för accelererade elektroner är mycket kortare än våglängden för synligt ljus.
Referenser
Vidare läsning
- Sueters - Di Meo, Josey; Liv, Nalan; Hoogenboom, Jacob P. (2016). "Använda avancerad korrelativ mikroskopi för att studera komplexa biologiska prover". Encyclopedia of Analytical Chemistry . s. 1–31. doi : 10.1002 / 9780470027318.a9473 . ISBN 9780470027318 .
- Zonnevylle, AC; Van Tol, RFC; Liv, N .; Narvaez, AC; Effting, APJ; Kruit, P .; Hoogenboom, JP (2013). "Integrering av ett hög-NA-ljusmikroskop i ett svepelektronmikroskop" . Journal of Microscopy . 252 (1): 58–70. doi : 10.1111 / jmi.12071 . ISSN 0022-2720 . PMID 23889193 .