Ziehl – ​​Neelsen fläck - Ziehl–Neelsen stain

Mycobacterium tuberculosis visualisering med hjälp av Ziehl – ​​Neelsen fläcken
Ziehl – ​​Neelsen (syrafast) fläck-diagram över grundläggande steg

Ziehl – ​​Neelsen-färgning är en typ av syrafast fläck, som först introducerades av Paul Ehrlich . Ziehl – ​​Neelsen-färgning är en bakteriologisk fläck som används för att identifiera syrafasta organismer, främst Mykobakterier . Den är uppkallad efter två tyska läkare som modifierade fläcken: bakteriologen Franz Ziehl (1859–1926) och patologen Friedrich Neelsen (1854–1898).

Mykobakterier

I anatomiska patologiprover har immunhistokemi och modifieringar av Ziehl – ​​Neelsen-färgning (såsom Fite-Faraco-metoden ) jämförbar diagnostisk nytta. Båda är bättre än traditionell Ziehl – ​​Neelsen -färgning.

Släktet Mycobacterium är en långsamt växande bakterie, som består av små stavar som är något böjda eller raka och anses vara grampositiva. Vissa typer av Mycobacteria bildar grenar eller trådar. Vissa mykobakterier är fritt levande saprofyter, men många är patogener som orsakar sjukdom hos djur och människor. Mycobacterium bovis orsakar tuberkulos hos nötkreatur. Eftersom tuberkulos kan spridas till människor pastöriseras mjölk för att döda någon av bakterierna. Några Mycobacteria -arter som orsakar sjukdom hos människor inkluderar Mycobacterium leprae , Mycobacterium kansasii , Mycobacterium marinum , Mycobacterium bovis , Mycobacterium africanum och medlemmar i Mycobacterium avium -komplexet. Mycobacterium tuberculosis är en art av Mycobacterium som orsakar tuberkulos (TB). Mycobacterium tuberculosis är en luftburen bakterie som vanligtvis infekterar de mänskliga lungorna. Symtom på TB inkluderar dålig hosta, bröstsmärta, trötthet, viktminskning, ingen aptit, frossa, feber och nattliga svettningar. Den typiska behandlingen för behandling av en latent TB -infektion inkluderar användning av isoniazid, rifapentin och rifampin. Behandlingen ändras för dem som har utvecklat en läkemedelsresistent stam av TB. Test för TB inkluderar blodprov, hudtester och röntgenstrålar på bröstet. När man tittar på utstrykningen för TB färgas det med en syrafast fläck. Dessa syrafasta organismer som Mycobacterium innehåller stora mängder lipidsubstanser inom sina cellväggar som kallas mykolsyror. Dessa syror motstår färgning med vanliga metoder såsom en Gram -färgning . Det kan också användas för att fläcka några andra bakterier, till exempel Nocardia . De reagenser som används för Ziehl – ​​Neelsen -färgning är - karbolfuchsin , sur alkohol och metylenblått . Sursnabba basiller är ljusröda efter färgning.

Svampar

Ziehl – ​​Neelsen färgning är en typ av smalspektrum svampfläck. Små spektrum av svampfläckar är selektiva, och de kan hjälpa till att skilja och identifiera svampar. Resultaten av Ziehl – ​​Neelsen -färgning är varierande eftersom många svampcellväggar inte är sura snabba. Ett exempel på en vanlig typ av syrafast svamp som vanligtvis färgas med Ziehl – ​​Neelsen-färgning kallas Histoplasma (HP). Histoplasma finns i jord och avföring från fåglar och fladdermöss. Människor kan drabbas av histoplasmos genom inandning av svampsporerna. Histoplasma kommer in i kroppen och går till lungorna där sporerna blir till jäst. Jästen kommer in i blodet och påverkar lymfkörtlar och andra delar av kroppen. Vanligtvis blir människor inte sjuka av att andas in sporerna, men om de gör det har de vanligtvis influensaliknande symtom. En annan variant av denna färgningsmetod används i mykologi för att differentiellt fläcka syrafasta inkrusningar i nagelbågshyferna hos vissa svamparter i släktet Russula . Vissa fria endosporer kan förväxlas med små jäst, så färgning används för att identifiera de okända svamparna. Det är också användbart vid identifiering av vissa protozoer, nämligen Cryptosporidium och Isospora . Ziehl – ​​Neelsen -fläcken kan också hindra diagnosen vid paragonimiasis eftersom ägg i sputumprov för ägg och parasit (O&P) kan lösas upp av fläcken och används ofta i denna kliniska miljö eftersom tecken och symtom på paragonimiasis mycket liknar de av TB.

Historia

År 1882 upptäckte Robert Koch tuberkulosens etiologi. Strax efter Kochs upptäckt utvecklade Paul Ehrlich en fläck för mycobacterium tuberculosis, kallad alun hematoxylin fläck. Franz Ziehl ändrade sedan Ehrlichs färgningsteknik genom att använda karbolsyra som bets. Friedrich Neelsen behöll Ziehls val av betsande men ändrade den primära fläcken till carbol fuchsin. Ziehl och Neelsens modifieringar har tillsammans utvecklat Ziehl – ​​Neelsen -fläcken. Ytterligare en syrafast fläck utvecklades av Joseph Kinyoun genom att använda färgningstekniken Ziehl – ​​Neelsen men avlägsna uppvärmningssteget från proceduren. Denna nya fläck från Kinyoun fick namnet Kinyoun -fläcken.

Procedur

Ett typiskt AFB -fläckförfarande innefattar att tappa cellerna i suspension på ett objektglas, sedan lufttorka vätskan och värmefixera cellerna.

Sammanfattning av syrafast fläck (Ziehl – ​​Neelsen fläck)
Tillämpning av Reagens Cellfärg
Surt snabbt Icke-syra snabbt
Primärt färgämne Carbol fuchsin Röd Röd
Avfärgare Sur alkohol Röd Färglös
Motfläck Metylenblått / malakitgrönt Röd Blå

Studier har visat att en AFB -fläck utan kultur har ett dåligt negativt prediktivt värde. En AFB -kultur bör utföras tillsammans med en AFB -fläck; detta har ett mycket högre negativt prediktivt värde.

Mekanism för syra-snabb färgning i syra-snabba celler och icke-syra-snabba celler.

Mekanismförklaring

Inledningsvis fläckar carbol fuchsin varje cell. När de färgas med syraalkohol blir det bara syrafasta bakterier som färgas eftersom de inte har ett tjockt, vaxartat lipidlager som syrafasta bakterier. När motfärg appliceras, tar icke-syrafasta bakterier upp den och blir blå (metylenblå) eller grön (malakitgrön) när den ses under mikroskopet. Sursnabba bakterier behåller karbolfuchsin så att de ser röda ut.

Ändringar

  • 1% svavelsyraalkohol för aktinomyceter , nocardia .
  • 0,5–1% svavelsyraalkohol för oocyster av isospora , cyklospora .
  • 0,25–0,5% svavelsyraalkohol för bakteriella endosporer.
  • Differentialfärgning - isättika används, ingen värme appliceras, sekundär fläck är Loefflers metylenblå.
  • Kinyoun -modifiering (eller kall Ziehl – ​​Neelsen -teknik) är också tillgänglig.
  • Ett protokoll där ett detergent ersätts med den mycket giftiga fenolen i fuchsinfärgningslösningen.

Se även

Exempel på online -protokoll

Referenser

Bibliografi

  • "Microbiology with Diseases by Body System", Robert W. Bauman, 2009, Pearson Education, Inc.

externa länkar