H & E -fläck - H&E stain

Näthinnan (en del av ögat ) färgad med hematoxylin och eosin , cellkärnor färgade blålila och extracellulärt material färgat rosa.

Hematoxylin och eosinfärgning ( eller hematoxylin och eosin stain eller hematoxylin-eosinfärgning , ofta förkortat hematoxylin-eosin-färgning eller HE fläck ) är en av de huvudsakliga vävnadsfläckar som används i histologi . Det är den mest använda fläcken vid medicinsk diagnos och är ofta guldstandarden . Till exempel, när en patolog tittar på en biopsi av en misstänkt cancer , är det histologiska avsnittet troligen färgat med H&E.

H&E är kombinationen av två histologiska fläckar: hematoxylin och eosin . Hematoxylin fläckar cellkärnor en purpurrött blått och eosin färgar den extracellulära matrisen och cytoplasman rosa, med andra strukturer som tar olika nyanser, nyanser och kombinationer av dessa färger. Därför kan en patolog enkelt skilja mellan de nukleära och cytoplasmatiska delarna av en cell, och dessutom visar de övergripande färgmönstren från fläcken den allmänna layouten och fördelningen av celler och ger en allmän översikt över ett vävnadsprovs struktur. Således ger mönsterigenkänning, både av experter själva och av programvara som hjälper dessa experter (inom digital patologi ), histologisk information.

Denna fläckkombination introducerades först 1876 av A. Wissowzky.

Användningsområden

H & E -färgningsförfarandet är den huvudsakliga fläcken i histologi delvis eftersom det kan göras snabbt, inte är dyrt och fläckar vävnader på ett sådant sätt att en avsevärd mängd mikroskopisk anatomi avslöjas och kan användas för att diagnostisera ett brett spektrum av histopatologiska tillstånd. Resultaten från H & E -färgning är inte alltför beroende av kemikalien som används för att fixera vävnaden eller små inkonsekvenser i laboratorieprotokoll, och dessa faktorer bidrar till dess rutinmässiga användning i histologi.

H & E -färgning ger inte alltid tillräckligt med kontrast för att differentiera alla vävnader, cellulära strukturer eller distribution av kemiska ämnen, och i dessa fall används mer specifika fläckar och metoder.

Metod för applicering

Rack med objektglas som tas bort från ett bad med hematoxylinfläck.

Det finns många sätt att förbereda hematoxylinlösningarna (formulering) som används i H & E -förfarandet. Dessutom finns det många laboratorieprotokoll för att producera H & E -färgade objektglas, varav några kan vara specifika för ett visst laboratorium. Även om det inte finns något standardförfarande, är resultaten enligt konventionen någorlunda konsekventa i och med att cellkärnor färgas blått och cytoplasma och extracellulär matris färgas rosa. Histologilaboratorier kan också justera mängden eller typen av färgning för en viss patolog.

Efter att vävnader har samlats in (ofta som biopsier ) och fixerats, dehydreras de vanligtvis och inbäddas i smält paraffinvax , det resulterande blocket monteras på en mikrotom och skärs i tunna skivor. Skivorna fästs på objektglas i mikroskop, vid vilken tidpunkt vaxet avlägsnas med ett lösningsmedel och vävnadsskivorna som fästs på objektglasen rehydratiseras och är klara för färgning. Alternativt är H & E -fläck den mest använda fläcken vid Mohs -operation där vävnader vanligtvis fryses, skärs på en kryostat (en mikrotom som skär frusen vävnad), fixeras i alkohol och sedan färgas.

H & E -färgningsmetoden innefattar applicering av hematoxylin blandat med ett metalliskt salt eller betsande , ofta följt av en sköljning i en svag syralösning för att avlägsna överflödig färgning ( differentiering ), följt av blåsning i lätt alkaliskt vatten. Efter applicering av hematoxylin motverkas vävnaden med eosin (oftast eosin Y ).

Resultat

Hematoxylin huvudsakligen färger de kärnor av cellerna blå eller mörklila, tillsammans med några andra vävnader, såsom keratohyalin granuler och förkalkade material. Eosin färgar cytoplasman och några andra strukturer inklusive extracellulär matris som kollagen i upp till fem nyanser av rosa. De eosinofila (ämnen som färgas av eosin) strukturer består i allmänhet av intracellulära eller extracellulära proteiner . De Lewy-kroppar och Mallory kroppar är exempel på eosinofila strukturer. Det mesta av cytoplasman är eosinofil och görs rosa. Röda blodkroppar färgas intensivt röda.

Handlingssätt

Även om hematein , en oxiderad form av hematoxylin, är det aktiva färgämnet (i kombination med ett mordmedel) kallas fläcken fortfarande som hematoxylin . Hematoxylin, när den kombineras med ett betningsmedel (vanligast aluminium alun ) ofta anses "likna" en basisk, positivt laddad, eller katjonisk fläck. Eosin är en anjonisk (negativt laddad) och sur fläck. Färgning av kärnor med hemalum (en kombination av aluminiumjoner och hematein) beror vanligtvis på bindning av färgämnes-metallkomplexet till DNA, men kärnfärgning kan erhållas efter extraktion av DNA från vävnadssektioner. Mekanismen skiljer sig från den för kärnfärgning med basiska (katjoniska) färgämnen, såsom tionin eller toluidinblått . Färgning med basiska färgämnen sker endast från lösningar som är mindre sura än hemalum, och det förhindras genom tidigare kemisk eller enzymatisk extraktion av nukleinsyror. Det finns bevis som tyder på att koordinatbindningar, liknande de som håller aluminium och hematein, binder hemalumkomplexet till DNA och till karboxigrupper av proteiner i kärnkromatinet .

Strukturerna behöver inte vara sura eller basiska för att kallas basofila och eosinofila; terminologin är baserad på cellkomponenters affinitet för färgämnena. Andra färger, t.ex. gul och brun, kan finnas i provet; de orsakas av inneboende pigment som melanin . Basala skikt behöver färgas av PAS -fläckar eller några silverfläckar om de måste vara väl synliga. Retikulära fibrer kräver också silverfärg. Hydrofoba strukturer tenderar också att förbli tydliga; dessa är vanligtvis rika på fetter, t.ex. adipocyter , myelin runt neuronaxoner och Golgi -apparatmembran .

Exempel på H & E -färgade vävnader

Referenser

Vidare läsning

• Kiernan JA (2008) Histologiska och histokemiska metoder: teori och praktik. 4: e upplagan Bloxham, Storbritannien: Scion.
• Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Kärnkärlsfläckar med lösliga metakrom härdiga sjöfärger. Effekten av kemiska slutgruppsblockerande reaktioner och artificiell introduktion av syragrupper i vävnader. Histokemi 49: 23–35.
• Llewellyn BD (2009) Kärnfärgning med alunhematoxylin. Biotech. Histochem. 84: 159–177.
• Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Tillämpning av nuvarande kemiska koncept på fläckar av metallhematin och -brazilein. Histokemi 85: 353–364.

externa länkar

• SIGMA-ALDRICH H&E Informational Primer

Protokoll

• Rutinmässig Mayers Hematoxylin och Eosin Stain (H&E)
• Hematoxylin & Eosin (H&E) färgningsprotokoll
• Rosen Lab, Institutionen för molekylär och cellulär biologi, Baylor College of Medicine) Protokoll steg för steg